大鼠谷氨酸(Glu)酶联免疫说明书实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠谷氨酸(Glu)水平。用纯化的大鼠谷氨酸(Glu)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入谷氨酸(Glu),再与HRP标记的谷氨酸(Glu)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸(Glu)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠谷氨酸(Glu)浓度。 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。 2.批内与批间应分别小于9%和11% 大鼠谷氨酸(Glu)检测范围:8nmol/L -300nmol/L 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月 试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 | 说明书 | 1份 | 1份 | | 封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | | 密封袋 | 1个 | 1个 | | 酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 | 标准品:360nmol/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 | 浓缩洗涤液 | (20ml×20倍)×1瓶 | (20ml×30倍)×1瓶 | 2-8℃保存 |
大鼠谷氨酸(Glu)酶联免疫说明书操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为240nmol/L,160nmol/L ,80nmol/L,40nmol/L, 20nmol/L)。 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 |